1、 超离心（UC）使用100,000 g的离心力来有效地分离小颗粒 ，如病毒 、细菌和细胞器UC根据其主要作用机制大致可分为三类 ：差速离心(DC)、等密度梯度离心和速率带离心(RZC) 。UC一直被认为是外泌体隔离的“黄金标准" 。然而 ，每种生物流体的复杂性 、特定组成和物理性质构成了获得可复制的纯外泌体制剂的技术障碍 。
a、差速离心这项技术依赖于通过沉降沉淀法对颗粒进行顺序分离，这取决于颗粒的大小和密度，通过使用一系列离心力和持续时间。DC通过300至100,000 g的离心力进行多次离心循环，通过控制不同的离心力和离心次数 ，依次去除细胞、细胞碎片和凋亡小体。最后一次离心(即100,000 g)后，通过去除上清来收集外泌体。然而，差速离心法有一些局限性，例如耗时，需要昂贵的设备，操作繁琐，并且在过高的转速下破坏外泌体的完整性。此外 ，一些脂蛋白可以与外泌体共沉淀因此 ，z6尊龙官网提出了密度梯度离心法来提高外泌体的纯度 。
b、使用两种类型的密度梯度超离心 ：等重超离心和RZC。DC经常遭受污染和外泌体损失 ，因为外泌体的不均匀性和细胞外囊泡大小有相当大的重叠。UC通常与等渗或RZC技术相结合，以允许相对低密度的外泌体悬浮以进一步净化。该技术还可以提高外泌体的分离量。典型的密度梯度UC包括以下步骤:首先，将覆盖样品颗粒密度范围的具有不同密度的生物相容性介质层(例如，碘二醇或蔗糖)放入管中，从底部到顶部密度逐渐降低。然后将感兴趣的样品添加到密度梯度介质的顶部，然后延长离心时间(例如 ，100,000 g离心16小时)。与普通UC相比，密度梯度离心可有效提高外泌体的纯度，例如，用密度梯度离心法从猪骨髓中分离骨髓细胞然而 ，蔗糖-密度梯度UC分离过程耗时长 ，需要大量的生物样品 ，回收率较低。Kuipers等人发现 ，对于小密度梯度的离心过程 ，碘沙醇比蔗糖更适合使用 ，因为在碘沙醇梯度中，外泌体可以以相对更快的速度达到平衡。因此，可以通过选择合适的惰性介质来优化外泌体的分离，从而提高分离效果。
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